روش تخمير چند لوله اي براي باكتري هاي گروه كليفرم

  • 0
كليفرم

روش تخمير چند لوله اي براي باكتري هاي گروه كليفرم

تخمير چند لوله اي براي باكتري هاي گروه كليفرم

گروه كليفرم شامل گونه هايي از باكتري هاي متعلق به خانواده آنتروباكتريا سه ها هستند. تعريف
قديمي از اين گروه بر اساس باكتري شناسي علمي نبوده، بلكه مبتني بر روش تخمير لاكتوز مي باشد. بنابر
اين در رابطه با روش تخمير، اين گروه تحت عنوان باكتري هاي هوازي وبي هوازي اختياري ، گرم منفي،
35 لاكتوز را ظرف 48 ساعت تخمير و توليد گاز و اسيد مي oC بدون اسپور و ميله اي شكل كه در دماي
كنند، تعريف مي شوند.

آزمايش استاندارد جهت شناسائي گروه كليفرم بر اساس روش تخمير چند لوله اي
و يا بوس يله روش (MF) صورت سه مرحله احتمالي ، تاييدي و تكميلي و نيز با تكنيك صافي غشائي
سوبستراي كروموژنيك انجام مي شود . هر روش محدوديت هاي خاص خود را دارد و با توجه به اهداف
آزمايش قابل كاربرد است . به منظور كسب نتايج معتبر نياز به اجراي جدي و دقيق شيوه هاي كنترل
كيفيت كار است.
زماني كه چندين لوله با غلظت هاي مختلف از نمونه در آزما يش تخمير استفاده مي شود، نتايج
ارگانيزمهاي موجود بيان مي شود . اين عدد، بر ( MPN ) آزمايش به صورت محتمل ترين تعداد ممكن
اساس فرمول هاي احتمالات، تخميني از تراكم متوسط كليفرمها در نمونه مورد بررسي ارا ئ ه مي نمايد .
تراكم كليفرمها همراه با ديگر اطلاعات به دست آ مده از مطالعات مجمل بهداشتي يا مهندسي امكان
بهترين ارزيابي از بازدهي فرآيند تصفيه آب و كيفيت بهداشتي منابع آب را فراهم مي سازد.

دقت هر آزمايش بستگي به تعداد لوله هاي به كار گرفته شده دارد . رضايتبخش ترين اطلاعات
زماني به دست خواهد آمد كه بيشترين غلظ ت هاي ساخته شده از نمونه، در تعدادي يا همه لوله ها، تشكيل
گاز را نشان بدهد و كمترين غلظت هاي نمونه تشكيل گاز در همه يا اكثريت لوله ها را نشان ندهد . تراكم
باكتريايي در نمونه ها به كمك فرمول هاي مشخص يا با استفاده از جداولي مبتني بر تعداد لوله هاي مثبت
در چ ندين غلظت مختلف، قابل تعيين است . تعداد حجم هاي برداشته شده از نمونه (يا ضرايب رقيق سازي
بر اساس فرض توزيع MPN براي نمونه ها ) بستگي به دقت مورد نظر براي نتايج كار دارد . جدول
پوآسون (توزيع تصادفي ) تهيه شده است . هر چند، اگر پيش از برداشتن حجم مورد نظر در هر م رحله،
نمونه كاملا به هم زده و مخلوط نشده باشد يا اينكه سلولهاي باكتريها به هم چسبيده و متراكم شده باشند،
كمتر از تعداد واقعي باكتريها خواهد بود. MPN

الف تعيين كيفيت آب آشاميدني
زماني كه نمونه آب آشاميدني برا ي سنجش كيفيت آن با استانداردهاي آژانس ح فاظت محيط زيست
آزمايش مي شود، پيشنهاد مي گردد كه از روش تخمير در 10 لوله يكسان هر ( EPA ) ايالات متحده
كدام حاوي 10 ميلي ليتر يا 5 لوله يكسان هر كدام حاوي 20 ميلي ليتر و يا يك بطري حاوي 100 ميلي
ليتر نمونه استفاده شود . زماني كه آزمايش تمام نمونه هاي آب آش اميدني به وسيله روش تخمير صورت
مي گيرد از مرحله تاييدي استفاده گردد . آزمايش تكميلي براي نمونه هاي انتخابي به صورت فصلي يا
حداقل هر سه ماه يك بار جهت كنترل كيفي به كار مي رود.

براي آزمايش هاي روزانه در بيشتر شبكه هاي آبرساني عمومي، به ويژه آن مواردي كه
گند زدايي مي شوند، هدف آزمايش كليفرم ارزيابي ميزان كارائي و بازدهي فرايندهاي تصفيه و راهبري
است. بخش عمده اي از كليفرم EPA تصفيه خانه آب و فاضلاب از طريق سنجش نتايج با استاندارد هاي
هاي موجود در سيستم توزيع لزوما نتيجه اشكال در كار تصفيه خانه يا منبع آب چاه نبوده بلكه دليل آن
مي تواند مربوط به رشد مجدد باكتري در خطوط اصلي باشد . از آنجائي كه تشخيص بين آلودگي ثانويه و
رشد مجدد كليفرم ها در سي ستم، كه مي تواند به دليل حضور مواد آلي باشد، مشكل است، بايد فرض را
بر آلودگي مجدد و ثانويه قرار داد، مگر اينكه خلاف آن ثابت شود.

ب تعيين كيفيت آب در مواردي غير از آب آشاميدني

در آزمايش آب هاي غير آشاميدني، يك گروه لوله حاوي نمونه كه با آب تا ده برابر رقيق شده
0 ، … ) بسته به احتمال تراكم / 0 1 ، 0 / 1 ، 0 مثل 1 / است ( از 10 ميلي ليتر شروع و مضاربي از 1
كليفرم تهيه شده و طي مراحل احتما لي و تاييدي اندازه گيري مي شوند . در اين آزمايش مي توان از
مرحله تكميلي نيز به عنوان يك معيار كنترل كيفي براي حداقل 10 % لوله هاي مثبت حاوي آ ب آشاميدني
كه بر مبناي آزمايشات فصلي نمونه برداري شده اند، استفاده نمود . به طور كلي هدف از آزمايش آ ب غير
آشاميدني ، بر آورد شدت آلودگي باكتريايي، تعيين منبع آلو دگي، اجراي استاندارد هاي كيفي آب و يا
رديابي نحوه بقاي ميكرو ارگانيسم ها مي باشد . هر آزمايش داراي مقادير عددي براي گزارش نتايج
براي تراكم كليفرم ها به MPN است. روش تخمير چند لوله اي مي تواند برآوردهاي معتبري بر اساس
دست دهد . براي اين كار تعداد كافي نمونه بايد آزمايش شوند تا نتايج آنها نماينده واقعي وضعيت منبع
مورد بررسي باشد . به طور كلي ميانگين هندسي يا عدد ميانه از نتايج آزمايش تعدادي نمونه، رقمي را ارائه
مي كند كه در آن تاثير تغييرات در شرا يط نمونه هاي برداشته شده به حداقل رسيده است . در همين راستا
روش شمارش مستقيم به كمك صافي غشائي، مي تواند شيوه هاي بهتري براي دستيابي به هدف باشد.

ج آزمايش نمونه هاي ديگر
روش تخمير چند لوله اي براي آزمايش نمونه هاي حاوي نمك يا آب شور، به علاوه نم ونه
هاي گل و لاي، رسوبات و لجن كاربرد دارد . براي هر نوع نمونه مي بايست به موارد اشاره شده جهت
انتخاب حجم مناسب و تعداد لوله هاي حاوي نمونه رقيق شده توجه گردد.
براي آماده سازي نمونه ها ي جامد يا نيمه جامد، ابتدا بايد آنها را توزين نمود و سپس آنها را با
0 رقيق كرد براي مثال، ابتدا 50 گرم نمونه را در ظرف استريل مخلوط كن ريخته، 450 ميلي / ضرايب 1
0 % به آن اضافه نمود و مخلوط را به مدت 1 تا 2 دقيقه با / ليتر بافر فسفات استريل يا آب پپتون دار 1
8000 ) بهم زد. از اين مخلوط يكنواخت آبكي، محلول هاي رقيق شده اي با رقت ده rpm ) سرعت كم
برابر، سريعا و پيش از ته نشيني آن تهيه مي شود.


Leave a Reply

نوشته‌های تازه

آخرین دیدگاه‌ها