باکتری های هتروتروف در آب
باکتری های هتروتروف در آب
باکتری های هتروتروف در آب شامل تعداد کل میکروب های موجود در واحد حجم نمونه است که در نمونه های آب به دلایل زیر، بررسی می شود.
- مقادیر زیاد باکتری، حتی در صورت غیر بیماری زا بودن، نشان دهنده ی مدار قابل ملاحظه ای مواد آلی قابل تجزیه است. که با رشد در دیواره ی لوله های انتقال آب، منجر به کاهش توانایی انتقال آنها می شوند. قسمت هایی از باکتری ها نیز ممکن است وارد آب لوله کشی مصرف کننده شوند.
- در مواردی که برای فرایندهای صنعتی از اب آشامیدنی استفاده می شود (در صنایع غذایی) تعداد کم باکتری، به ویژه باکتری غیر بیماریزا مطلوب می باشد.
- چنانچه این آزمایش از لحاظ بهداشت عمومی به طور روتین انجام گیرد، معیار معتبری برای ارزیابی فرآیند تصفیه و سیستم انتقال می باشد. اگر فرآیند تصفیه، به درستی انجام نشود، به ورود باکتری های غیر بیماریزای خاک به آب منجر می شود که با آزمایش های معمولی روتین به تنهایی قابل تشخیص نیست.
در این آزمایش، روش استاندارد کشت در محیط (PCA =Plate Count Agar) در شرایط هوازی، به مدت 3 روز در دمای ċ 35 به کار می رود. روش مذکور، همه ی میکروب هایی را که در این شرایط نمیتواند رشد کنند (مانند بی هوازیهای اجباری) حذف می نماید. درضمن، باید در نظر داشت که برخی از سلول های میکروبی، به صورت تجمعی به یکدیگر می چسبند و بنابر این، هر کلنی الزاما از یک سلول منشأ نمیگیرد.
این روش، تنها شاخصی از کل باکتریهای زنده در حجم معینی از آب میباشد که به طور یقین، گویای تعداد واقعی نیست.
آنالیز باکتری های هتروتروف در آب
باکتری های هتروتروف در آب با یک پیپت استریل، ml1 از آب نمونه (آشامیدنی) را وارد یک پیپت استریل کنید. حال cc15 محیط کشت PAC که دمای آن ċ45 است به ان اضافه کنید و با حرکت چرخشی کاملا یکنواخت مخلوط کنید. منتظر باشید تا محیط ببندد و سپس در دمای ċ 35 قرار دهید. در صورت نمونه برداری از آب سایر منابع، باید رفت هایی از آب نمونه تهیه شود. بعد از 48 ساعت پلیت هایی را که دارای 30-300 کلنی هستند شمارش کنید (برای هر رقت پویلیت تهیه کنید). تعداد کلنیها را در عکس ضریب رقت ضرب کنید. به عنوان مثال اگر در پلیتی با رقت 20*10-4 خواهد بود.
این روشف به روش پوریلیت معروف است و با آن، تمام باکتری های موجود در یک نمونه (آب، فاضلاب و …) را نمی توان شمارش کرد، زیرا روش با محیط کشتی که بتواند کلیه نیازهای فیزیولوژیک باکتری های گوناگون را فراهم آورد وجود ندارد.
برای شمارش باکتری ها در یک نمونه، روش دیگری وجود دارد به نام روش پخش کردن در سطح () که با روش پوریلیت تفاوت کمی دارد. در این روش، به جای مخلوط کردن ml1 نمونه با رقتهای آن با محیط کشت، ml 0.1 نمونه با رقت های آن در سطح پلیت و با استفاده از میله شیشه ای خمیده پخش میشود. پس از طی زمان انکویاسیون (به طور معمول 48 ساعت) کلنی هایی را که در سطح پلیت ظاهر شده اند، شمارش نمود، و جواب در عکس ضریب رقت و در عدد 10 ضرب می شود. به عنوان مثال، اگر از رقت 8*10-5 کلنی به دست آمده باشد تعداد باکتریهای موجود در ml1 نمونه CFU 8*10*105 خواهد بود.
